[帮助]用胰蛋白酶收集细胞有哪些注意事项?

时间:2019-11-18 09:46

小中达胰蛋白酶的作用不容忽视,但有数百个细胞,所用的胰蛋白酶以L计。我还没有听到30分钟的胰蛋白酶消化来消化细胞内蛋白质的消息。
这是因为胰腺酶基本上不可能破坏细胞膜。
传统细胞在室温下消化15分钟并不少见,并且细胞可以存活。
他的协议很奇怪。该融冰方案应为无SDS的清洁剂。裂解5分钟后,将其离心,之后主要的支架蛋白在沉淀物中,不会进入上清液。蛋白质含量超过80%,因此蛋白质含量不高。由于这种方法,在5分钟的冰裂解环境中以14,000 rpm离心后,细胞会变成沉淀物。
1,细胞核可能尚未破裂,核蛋白在沉积物中
2,细胞质骨架蛋白尚未完全溶解,可溶性细胞质蛋白经离心分离得到,含量自然较低。
我们建议将裂解时间以4 rpm的速度延长4小时,或者直接替换裂解方案和sds。
此外,应排除裂解液对测试的干扰。


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